一、 准备工作
（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置
室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二) 试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）
（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞*终浓度为0.8%。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后
离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃
放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）热放散：充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，
置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心3000rpm，2－3分钟，取上清。即放散液。
（七）酸放散：
1、取直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性待检血样（或在体外已吸收血清的红细胞），离心
尽可能去除血或血浆。
2、用生理盐水洗涤待检红细胞4次，以除去未结合的抗体，留取约1ml的*后一次洗涤液。
3、配制酸放散液：取4体积的放散液A与1体积的放散液B混合均匀。
4、将1ml待检压积红细胞与1ml酸放散液混合均匀，室温孵育1－2分钟。
5、以3000rpm离心1分钟。
6、立即将酸放散液移到另一支干净试管中，并加入紫红色中和液调颜色至肉色或水粉色
（500ul放散液加入中和液60－80ul），此时PH值近中性。以3000rpm离心1－2分钟，
取上清即放散液。
7、放散液与*后一次洗涤液做平行检测。
8、用试管法或微柱凝胶抗人球蛋白卡检测，出现阴性反应，则需要加入人IgG致敏的红细胞
做确认试验，以保证抗人球蛋白试剂的有效性。
二、 实验步骤
1、取新生儿的红细胞0.8%悬液50ul分别加入新生儿ABO、RhD血型检测卡(微柱凝胶)卡
的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟（900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟）。
3、取出，判读结果。
4、新生儿卡Ⅱ1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散
液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入**、4孔；将B型红细胞悬液50ul分别加入第2、5孔；
将O型红细胞悬液50ul分别加入第3、6孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读
结果。
结果判定
阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体
或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。表明血清中无相应抗
原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳
性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱（2+或1+）。
直抗试验以出现凝集为阳性，游离和放散试验均以检出可以和新生儿红细胞反应的抗体
为阳性。
三、注意事项
1、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做
本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标
本是否可以做本实验。
2、血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻
碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。
3、如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因
所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论。
4、父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替。
5、洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过56℃，以防溶血；天冷时放散液
注意保温；吸出尽可能多的放散液；注意除去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要
充分洗涤，至少三次。
6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
7、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心
机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
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